蒸汽灭菌锅内蒸汽的温度不仅与压力有关，而且与蒸汽的饱和度有关。因此在使用高压蒸汽灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，灭菌锅内冷空气未排尽时，即使蒸汽压力达到要求，气压针所指的压强不是饱和蒸汽产生的压强。相同的压强，混有空气的蒸汽其温度低于饱和蒸汽所产生的温度，温度上不到相应的高度，而且还影响高压蒸汽穿透被灭菌物品的能力，因此完全排除锅内空气使锅内全部是水蒸气，才能彻底灭菌。

高压蒸汽灭菌的原理：利用重力置换原理，使热蒸汽在灭菌器中从上而下，将冷空气由下排气孔排出，全部由饱和蒸汽取代，利用蒸汽释放的潜热使物品达到无菌。

高压蒸汽灭菌锅使用过程中的注意事项：

1、锅内必须用蒸馏水或纯化水。

2、待灭菌物品放置不宜过紧。?

3、锅盖的螺母必须对称拧紧。

4、必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。

5、如果灭菌后的培养基在锅内不及时拿出，需在蒸汽放尽后将锅盖打开，切忌将培养基封闭在锅内过夜。

6、压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放汽，以防止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出。

7、操作全程必须注意安全，以防烫伤。